ОТРИМАННЯ РОСЛИН-ТРАНСФОРМАНТІВ, ЩО НЕСУТЬ РЕПОРТЕРНИЙ ГЕН ПІД КОНТРОЛЕМ ПРОМОТОРА АРХ2
Анотація
Аскорбатпероксидаза (APX) являє собою фермент, що бере участь у захисті рослинних клітин від оксидативного стресу. У Arabidopsis thaliana, APX кодується малою мультигенною родиною, що включає 8 генів. 8 ізоформ APX присутні в хлоропластах, пероксисомах і цитозолі та диференційно активуються у відповідь на абіотичний стрес. Apx2 є типовим стрес-індукованим геном, який експресується тільки за стресових умов. Для того, щоб з'ясувати стрес-залежну експресію промотора гену Apx2 в різних органах і тканинах A. thaliana, ця ділянка була ампліфікована за допомогою ПЛР та клонована. Промотор був об’єднаний з репортерним геном uidA, що кодує β-глюкоронідазу та введений в рослини A. thaliana дикого типу, з використанням методу агробактеріальної трансформації. Трансгенні рослини були ідентифіковані за допомогою гербіциду BASTA. Наявність рекомбінантного конструкту у рослин було підтверджено за допомогою ПЛР. В цілому було відібрано 7 незалежних ліній, в складі яких містився рекомбінантний конструкт Pro-APX2: GUS.
Ключові слова: промотор Арх2, бінарний вектор, трансгенні рослини, BASTA, репортерний ген.
Посилання
Bechtold N., Ellid J., Pelletier G. In planta Agrobacterium-mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants. C. R. Acad. Sci. Paris, Life Sci. 1993; 316: 1194-1199.
Becker D., Kemper E., Schell J., Masterson R. New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left T-DNA border. Plant Mol. Biol. 1992; 20: 1196-1197.
Chang C., Chen C., Ball L., Fryer M.J., Baker N.R., Karpinski S., Mullineaux P.M. Induction of ASCORBATE PEROXIDASE 2 expression in wounded Arabidopsis leaves does not involve known wound-signalling pathways but is assiciated with changes in photosynthesis. The Plant J. 2004; 38: 499-511.
Chen X., Wang M.L., Holbrook C. Identification and characterization of a multigene family encoding germin-like proteins in cultivated peanut. Plant. Mol. Biol. Rep. 2011; 29(2): 389-403.
Dabrowska G., Kata A., Goc A., Szechynska-Hebda M., Skrzyptek E. Characteristics of the plant ascorbate peroxidase family. Acta Biologica Cracoviensia. 2007; 49: 7-17.
Galvez-Valdivieso G., Fryer M.J., Lawson T., Slattery W., Truman W., Smimof N., Asami T., Davies W.J., Jones A.M., Baker N.R., Mullinaux P.M. The high light response in Arabidopsis involves ABA signalling between vascular and bundle sheath cells. The Plan Cell. 2009; 21: 2143-2162.
Grégoire C., Rémus-Borel W., Vivancos J., Labbé C., Belzile F., Bélanger R.R. Discovery of a multigene family of aquaporin silicon transporters in the primitive plant Equisetum arvense. Plant J. 2012; 72(2): 320–330.
Karpinski S., Escobar C., Karspinska B., Creissen G., Mullineaux P.M. Photosynthetic electron regulates the expression of cytosolic ascorbate peroxidase genes in Arabidopsis thaliana excess light stress. The Plant Cell. 1997; 9: 627-640.
Li Y., Darley C.P., Ongaro V., Fleming A., Schipper O., Baldauf S.L., McQueen-Mason S.J. Plant expansis are a complex multigene family with an ancient evolutionary origin. Plant Physiol. 2002; 128: 854-864.
Mittler R., Kim Y.S., Song L., Coutu J., Coutu A., Ciftci-Yilmaz S., Lee H., Stevenson B., Zhu J. Gain- and loss-of-function mutations in Zat10 enhance the tolerance of plants to abiotic stress. FEBS Letters. 2006;580: 6537-6542.
Panchuk I., Volkov R., Schöffl F. Heat stress- and heat shock transcription factor-dependent expression and activity of ascorbate peroxidase in Arabidopsis. Plant Physiol. 2002; 129(6): 838-853.
Rossel J.B., Walter P.B., Hendickson L., Chow W.S., Poole A., Mullineaux P.M., Pogson D.J. A mutation affecting ASCORBATE PEROXIDASE 2 gene expression reveals a link between responses to high light and drought tolerance. Plant Cell. 2006; 29: 269-281.
Shigeoka S., Ishikava T., Tamoi M., Miyagawa Y., Takeda T., Yabuta Y., Yoshimura K. Regulation and function of ascorbate peroxidase isoenzymes. J. Exp. Bot. 2002; 53: 1305-1319.
Suzuki N., Miller H., Sejima H., Harper J., Mittler R. Enhanced seed production under prolonged heat stress condition in Arabidopsis thaliana plantas deficient in cytosolic ascorbate peroxidase 2. J. Exp. Bot. 2012; 1-11.
