ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ВИЗНАЧЕННЯ КІЛЬКОСТІ ЕТАПІВ ЗАМОРОЖУВАННЯ КЛІТИН ГРИБІВ CANDIDA TROPICALIS ДЛЯ ЇХ РУЙНУВАННЯ ТА ОТРИМАННЯ БІЛКІВ І ПОЛІСАХАРИДІВ
DOI:
https://doi.org/10.31861/biosystems2023.01.009Ключові слова:
Candida tropicalis, заморожування, кандидоз, білки, поліцукри, антиген, вакцинаАнотація
Кандидоз – захворювання, яке виникає при надмірному зростанні грибка кандиди. Відомо кілька видів цього збудника, кожен з яких може викликати ураження різних органів та систем. В останні часи стали з'являтися повідомлення про втрату чутливості грибів Candida до більшості протигрибкових препаратів, які використовується вже понад 40 років. Альтернативою протигрибковим лікарським засобам від кандидозу може бути використання вакцини для профілактики та лікування кандидозної інфекції. На нашу думку, перспективно використовувати кандидозну вакцину на основі субодиничної вакцини, яка містить фрагменти мікроорганізму, без баластних речовин. До фрагментів клітин грибів роду Candida, які володіють антигенними властивостями, відносять білки та поліцукри. Для виділення антигенних речовин з клітин грибів роду Candida нами було обрано метод руйнування – заморожування. Метою даною роботи було експериментальне обґрунтування кількості етапів заморожування для руйнування клітин грибів C. tropicalis АТСС 20336 та подальшого отримання білків і поліцукрів. Для визначення оптимальної кількості етапів заморожування при діапазоні температури від (25 ± 2)°С до (-25 ± 2) °С, щоб зруйнувати клітини грибів C. tropicalis були проведені дослідження з 3, 4, 5, та 6 етапами заморожування. Використовували центрифугування для відокремлення зайвих компонентів. Далі проводили попереднє та стерилізуюче фільтрування на мембранних фільтрах з діаметром пор 0,45 мкм та 0,22 мкм. У кожному випадку було проведене визначення білку, поліцукрів та моноцукрів. Визначення білка проводили згідно ДФУ. Для визначення поліцукрів проводили реакцію з фенолом та сірчаною кислотою. Хроматографічні дослідження моноцукрів проводили за методом паперової хроматографії згідно ДФУ. За результатами проведених досліджень встановлено, що розчини, які одержано при 5 та 6 етапах заморожування біомаси клітин грибів C. tropicalis при температурі від (25 ± 2) °С до (-25 ± 2) °С містили найбільшу кількість білків та поліцукрів. Ймовірно, що при цих кількостях етапів заморожування біомаси клітин грибів C. tropicalis відбувається виділення діючих речовин з клітинних стінок та клітин грибів Candida. Таким чином можна зробити висновок, що 5 етапів заморожування є оптимальною кількістю, яка забезпечує максимальне виділення поліцукрів та білків швидко та економічно.
Посилання
Da Silva L.B.R., Taborda C.P., Nosanchuk J.D. Advances in Fungal Peptide Vaccines. J Fungi (Basel). 2020; 6 (3): 119. https://doi.org/10.3390/jof6030119.
Edwards J.E.Jr., Schwartz M.M., Schmidt C.S., et al.. A fungal immunotherapeutic vaccine (ndv-3a) for treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis-a phase 2 randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Clin Infect Dis. 2018; 66 (12): 1928-1936. https://doi.org/10.1093/cid/ciy185.
Howley M.M., Carter T.C., Browne M.L., at al. Fluconazole use and birth defects in the National Birth Defects Prevention Study. Am J Obstet Gynecol. 2016; 214 (5): 657. https://doi.org/10.1016/j.ajog.2015.11.022.
Mercer D.K., O'Neil D.A. Innate Inspiration: Antifungal Peptides and Other Immunotherapeutics From the Host Immune Response. Front Immunol. 2020; 17 (11): 2177. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.02177.
Nami S., Mohammadi R.., Vakili M. at al. Fungal vaccines, mechanism of actions and immunology: A comprehensive review. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2019; 109: 333-344. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.10.075.
Piccione D., Mirabelli S., Minto, N., Bouklas T. Difficult but not impossible: in search of an anti-Candida vaccine. Current Tropical Medicine Reports. 2019; 6: 42–49. https://doi.org/10.1007/s40475-019-00173-2.
Polesello V., Segat L.,Crovella S., Zupin L. Candida infections and human defensins. Protein Pept. Lett. 2017; 24 (8): 747-756. https://doi.org/10.2174/0929866524666170807125245.
Tarang S., Kesherwani V., LaTendresse B. at al. In silico design of a multivalent vaccine against Candida albicans. Scientific Reports. 2020; 1066 (2020): https://doi.org/10.1038/s41598-020-57906-x.
Tso G.H.W., Reales-Calderon J.A., Pavelka N. The elusive anti-Candida vaccine: lessons from the past and opportunities for the future. Front Immunol. 2018; 9: 897. https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.00897. eCollection 2018.
Wang X., Sui X., Yan L. at al. Vaccines in the treatment of invasive candidiasis. Virulence. 2015; 6 (4): 309-315. https://doi.org/10.4161/21505594.2014.983015
